微生物反应器的主要功能是模拟微生物生长或生产的自然环境,通过生化反应或微生物自身的代谢获得目标产物。
那么,它可以被用来进行细胞裂解、细胞应激及细胞毒性筛选的测定吗?由于这类实验通常样品量比较大,或者需要离线检测,又或者需要为此重新配置设备,同时人力和实验成本也相当高等等。也许你会觉得不太可能。
BioLector XT高通量微型生物反应器 PI是一种多功能染料,常用于鉴别细胞群中的死细胞,并在多色荧光技术中用作复染剂。它仅能穿透细胞膜破裂的死细胞,嵌入细胞脱氧核糖核酸(DNA)后释放红色荧光,而不能穿透细胞膜完整的活细胞。 BioLector结合 PI 染色法进行细胞裂解、细胞应激及毒性筛选的具体应用。 大肠杆菌培养:采用 BioLector进行大肠杆菌 Bl21(DE3)菌种培养,培养条件:温度 37° C,振摇速度 800 rpm),微孔板为 BOH2 型 FlowerPlate® 微孔板(MTP),每孔填样体积为 800µL。培养基为缓冲液浓度为 50 mM 或 200 mM 的 Wilms-MOPS。 PI 浓度:将 1mM PI 染色液溶于磷酸盐缓冲液中配制 PI 原液。此原液需无菌过滤并在 4° C 下储存。PI 嵌入 DNA 时,为避免对用户造成伤害,培养基中的最终 PI 浓度不应过高。在本应用指南中,培养基最终 PI 浓度应为 5 µM。 诱导细胞死亡:在此培养案例中,通过在 7 小时后将培温度提升至 50°C或加入纯甲醇(MeOH)来诱导细胞死亡。 测定死亡细胞:诱导细胞死亡后,PI 渗入细胞膜破裂的细胞与 DNA 结合,导致荧光偏移,然后通过PI 滤光片模块检测死亡细胞的荧光信号。 细胞毒性筛选:采用 BioLector 进行PI 染色和检测进行细胞毒性筛选。添加 MeOH 对大肠杆菌 BL21(DE3)进行应激培养,如下图所示。 不同浓度的MeOH作为应急因素 对大肠杆菌培养的细胞毒性筛选
采用BioLector 通过 PI 染色测定细胞裂解
采用 BioLector通过 PI 测量应激细胞
欲了解BioLector高通量微生物反应器,请点击