真核蛋白表达与纯化服务
产品名称： 真核蛋白表达与纯化服务
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武汉摩尔生物科技有限公司
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由于应用于该领域的重组蛋白基本上均需要翻译后修饰，以获得与天然分子相同的生物活性，而真核细胞自身具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能，因此很多客户选择真核蛋白表达系统，表达高质量的重组蛋白。
本公司为您提供mg级的真核细胞表达的蛋白，帮助您快速获得满意的实验结果。
本公司为您提供mg级的真核细胞表达的蛋白，帮助您快速获得满意的实验结果。
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毕赤酵母（P. pastoris）系统表达与纯化服务
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主要步骤
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内容
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交付内容
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交付时间
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目标基因全基因合成
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1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子的优化 3. 合成设计好的基因序列 |
目的基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告
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2kb以下，2周左右
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目标基因亚克隆
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1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上 3. 测序验证构建质粒的准确性 4. 可提供表达载体（Ppic 9K系列为主） |
正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告
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有模板： 2-3周
无模板： 4周
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毕赤酵母表达菌株电转化和筛选
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1. 酶切线性化表达质粒
2. 将表达质粒通过电转化到高效的毕赤酵母表达菌株中
3. 通过PCR鉴定至少挑选5个阳性克隆
4. 进行高拷贝菌株筛选
5.可提供表达菌株：X33，GS115，和SMD1168 |
PCR阳性克隆和PCR结果报告以及高拷贝筛选报告
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2-4周
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毕赤酵母表达菌株筛选
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1. 将5个阳性克隆于BMGY培养基中扩增，然后换至BMMY培养基中，并加入甲醇诱导表达目标蛋白
2. SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达 3. 如果培养上清中检测不到表达，则通过将上清浓缩20倍作用再检测，或通过Western-blot方法检测目标蛋白表达（客户需要提供相关抗体） |
阳性克隆菌株及表达筛选结果报告
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2周
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毕赤酵母表达菌株表达优化
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1. 挑选20个阳性克隆进行常规表达筛选，并对其中表达最好菌株优化表达条件
2. 对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基，菌体密度，甲醇浓度，诱导时间等），提高目标蛋白的表达量 |
三个阳性克隆菌株及优化表达条件结果报告
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2周
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目标蛋白表达及纯化
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1. 摇瓶培养1L重组酵母菌，诱导表达目标蛋白
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白 3. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量 4. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性 |
纯化好的目标蛋白1mg以上及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达90%以上
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2-3周
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目标蛋白的再加工及详细检测
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1. 内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工
2. 通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量 |
加工后的终产品及相关实验和检测报告
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2周
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大规模制备
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按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品
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合格的目标蛋白及服务报告
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协商
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